膜過濾技術與切向流過濾

膜過濾技術（membrane filtration）為廣泛使用的分離與純化技術，其作用機制是利用濾膜孔徑來篩選不同大小的分子及粒子。 膜過濾技術可根據過濾分子的大小，從小分子至大分子依序分為逆滲透（reverse osmosis， RO）、納米過濾（nanofiltration，NF）、超過濾（ultrafiltration，UF）、微過濾（microfiltration，MF）、澄清（clarification）。
微過濾（MF）與超過濾（UF）是運用*廣泛的膜過濾技術。 微過濾技術可過濾 0.1 ~ 10 um 的分子，如細菌等; 而超過濾技術則可用以分離 0.001 ~ 0.1 um 的生物分子，如蛋白質、病毒等。 其中，超過濾技術屬于較為溫和的處理方式，不易造成生物分子變性（denature）或失活（inactive），使得超過濾技術在生物分子應用上更具有優(yōu)勢。 而切向流過濾 （Tangential Flow Filtration， TFF） 即為超過濾中*常使用的技術，常應用于如分子生物學 、生物化學 、免疫學、蛋白質化學、微生物學等生物學領域。

切向流過濾與傳統(tǒng)過濾方式之比較

一般傳統(tǒng)過濾法為直流式過濾 （Direct Flow Filtration， DFF; dead-end filtration），其樣品流垂直流動于膜表面，使小分子得以通過濾膜。 然而，大分子卻容易堆積于膜表面，形成濾餅層，而隨著過濾時間增加，濾餅層厚度會隨之變厚，使得濾膜堵塞，導致流速、分子分離效果下降，并且縮短濾膜使用壽命。
而于切向流過濾中，樣品流則是水平流動于膜表面，并以垂直于膜表面的方向進行過濾（即以正切角度進行過濾），使得樣品可以隨著流速循環(huán)、同時也對膜表面進行沖洗，避免大分子堆積在膜表面并防止?jié)舛葮O化降低流速，從而維持穩(wěn)定的流速，可有效地進行過濾及延長濾膜壽命。
功能方面，切向流過濾可同時進行濃縮（concentration）及滲濾（diafiltration），且試驗等級與量產等級的切向流設備共享參數，可輕松放大生產規(guī)模。
綜合上述多項優(yōu)勢，在生科、生技及生醫(yī)相關領域場所如醫(yī)院、藥廠等，已逐漸以切向流過濾取代傳統(tǒng)過濾法。

切向流過濾濾膜形式

TFF 適用多種型式的濾膜，如平板過濾膜 （flat plate），又稱為卡匣 （cassette; capsule)； 中空纖維膜 （hollow fiber; cartridge） 及螺旋狀過濾膜 （spiral wound）。 目前實驗室多以使用平板過濾膜及中空纖維膜為主。

使用切向流過濾系統(tǒng)進行滲濾

滲濾 （diafiltration）的定義為，將樣品中可以通過濾膜的小分子，如：鹽、小分子蛋白質、溶劑等，在樣品流流經濾膜時，透過濾膜，自樣品流中分離，并將大分子持續(xù)循環(huán)進行濃縮的過程。 滲濾常見應用包含透析、去鹽、緩沖液置換等，而其過程又分為不連續(xù)滲濾與連續(xù)滲濾兩種。

不連續(xù)滲濾（discontinuous diafiltration）是以手動方式將水/新鮮緩沖液/稀釋液以一定體積加入樣品中，待濃縮至一定體積后再次加入緩沖液后濃縮，不斷重復上述過程至滲濾完成。
不連續(xù)滲濾時，樣品濃度持續(xù)變化、易變性，且滲透量（流量）會隨著樣品濃度的增加而降低。

連續(xù)滲濾（continuous diafiltration），又稱為定容滲濾 （constant volume diafiltration） ，其過程以「與產生濾液的相同速度」來添加水/新鮮緩沖液/稀釋液等，來過濾掉原本溶液中的鹽類或其它小分子，因此進行連續(xù)滲濾的過程中，系統(tǒng)中總溶液體積不會改變， 因此生物分子不容易被破壞結構、產生變性。 此外，經實驗發(fā)現，相較于不連續(xù)滲濾，連續(xù)滲濾添加較少的緩沖液就可以達到99%的分離效果。

以去鹽為例，過濾過程中是透過添加滲濾體積（diafiltration volume， DV） 降低鹽濃度。 進行連續(xù)滲濾時，直接以5個DV，即可移除達約99%的鹽分子; 而在不連續(xù)滲濾時，在以手動方式每次添加1個 DV的狀況下，則必須在添加7個 DV 后，才可移除99%的鹽分子。
綜觀以上，連續(xù)滲濾被認為相較于不連續(xù)滲濾而言，是相對「溫和」的生物分子處理過程，在生科領域應用中更具有優(yōu)勢。

切向流過濾應用領域

• 濃縮、去鹽：如蛋白質、勝肽、核酸 （DNA， RNA） 等
• 分離、純化：如酵素、抗體、重組蛋白、病毒、疫苗等
• 緩沖液置換：如去除溶劑、透析等
• 澄清; 如細胞裂解物 、組織均質物 等
• 去熱原 ：如水、緩沖液、培養(yǎng)液等 – 須以管柱層析分析 （column chromatography） 的樣品前處理
• 細胞收集
• 濃縮病毒：濃縮溶瘤麻疹病毒 （oncolytic measles virus） 以*末期癌癥
• 臨床醫(yī)療：血液透析 （hemodialysis）、血紅素 （hemoglobin） 純化

附錄：如何選擇切向流過濾濾膜

切向流過濾系統(tǒng)中所使用的濾膜相較于直流過濾所使用的濾膜構造十分不同，在挑選時，建議可考慮以下幾個重點：

欲保留或移除目標分子

厘清實驗的目的是保留或是移除目標分子：濃縮為保留目標分子，滲濾、去鹽、溶液置換為移除目標分子。

目標分子的分子量

依照目標分子的大小，評估適用的濾膜孔徑大小，一般以截留分子量（MWCO， NMWL）或分子直徑表示。 濾膜的選擇，通常依廠家不同會選擇目標分子分子量1/3 ~ 1/6的 MWCO，即低于目標分子量的3~6倍，并留意欲分離的分子之間，大小至少應相差10倍以上，以確?；旌衔镉行Х蛛x; 若以分子直徑選擇濾膜，則選用濾膜孔徑 （um）小于目標分子直徑即可。
然而，分子量及分子直徑并無直接關系，無法進行換算，因此在選用濾膜時，應多加留意其標示。

回收率的要求高/低

回收率的需求與MWCO的選擇有關：
回收率要求不高（低）：可選用MWCO低于目標分子3倍的濾膜，其孔徑大、處理速度快。
回收率要求高：可選用MWCO低于目標分子6倍的濾膜，其孔徑小，但處理速度較慢。
此外，濾材的選擇也會影響回收率，一般分為 PES （polyethersulfone） 及纖維素材質，PES具有較高的樣品結合率，導致回收率較低; 纖維素跟樣品結合率低，因此具有高回收率，針對較為珍貴的樣品，即可選用纖維素制成的濾膜。

引用數據 ：

• A review of polymeric membranes and processes for potable water reuse, Progress in Polymer Science, 2018
• Application of a Hollow-Fiber, Tangential-Flow Device for Sampling Suspended Bacteria and Particles from Natural Waters, 1990
• Diafiltration: A Fast, Efficient Method for Desalting, or Buffer Exchange of Biological Samples, Pall
• EVALUATION OF CLEANING SPIRAL WOUND MEMBRANE ELEMENTS WITH THE TWO-PHASE FLOW PROCESS, USBR, 2003
• Introduction to Tangential Flow Filtration for Laboratory and Process Development Applications, Pall
• Introduction to Tangential Flow Filtration (TFF), UGA Master of Biomanufacturing and Bioprocessing, University of Georgia
• Protein Concentration and Diafiltration by Tangential Flow Filtration, Millipore
• Recent Development in Membrane and Its Industrial Applications. Membrane Technology in Oil and Gas Industry, 2005
• 蔣清榮、游勝杰，科學發(fā)展，流體中的*守門員-微過濾與超過濾，2008